數(shù)字PCR儀主要分為三大類:標(biāo)準(zhǔn)PCR(終點(diǎn)PCR)、實(shí)時定量PCR(qPCR)以及數(shù)字PCR(dPCR)。前兩者大家都很熟悉,而后者是這兩年冉冉升起的新星。
數(shù)字PCR儀主要是產(chǎn)生大量的核酸序列供后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用,比如測序、克隆,或僅僅是為了在凝膠上看看有沒有合適的條帶。
qPCR則是實(shí)時定量靶序列,通常被用來測定生物分子的豐度,而不是生成終產(chǎn)物
數(shù)字PCR儀也是定量的,但并非實(shí)時。反應(yīng)發(fā)生在大量的微小分區(qū)中。這些分區(qū)很小,其中每個可能包含0或1個DNA分子。通過計算陽性反應(yīng)的數(shù)量,研究人員能夠真正定量DNA。這比qPCR更為靈敏,也不需要標(biāo)準(zhǔn)曲線。
對于標(biāo)準(zhǔn)PCR儀和定量PCR儀之間的選擇,研究人員通常都心里有數(shù)。不過,說到qPCR和dPCR之間的選擇,研究人員就沒那么有把握了,有時也需要幫助。這個選擇通常取決于研究人員的應(yīng)用和他們想要回答的問題不過對于高通量應(yīng)用,qPCR則更實(shí)際。
大多數(shù)用戶以96孔形式運(yùn)行PCR反應(yīng),通常使用0.2mlPCR管。當(dāng)然也還有其他形式,適合更高的通量或不同的樣品量,如0.5ml管。允許不同大小的PCR管插在同一模塊上。當(dāng)同一實(shí)驗(yàn)室中的不同人在進(jìn)行不同的PCR檢測時,這特別有用。
一些PCR儀允許樣品模塊更換成兩個或多個更小的模塊。這種模塊化的系統(tǒng)就好像多臺熱循環(huán)儀一樣,能提高效率。比比科技的雙模塊設(shè)計讓研究人員能夠在不同模塊上運(yùn)行不同的循環(huán)步驟。同樣,PCR儀包含四個熱模塊,能夠獨(dú)立運(yùn)行四個循環(huán)步驟。據(jù)介紹,這種設(shè)計帶來了靈活性,也明顯縮短了優(yōu)化時間。